反相離子對色譜法建立的注意事項（二）

更新時間：2022-04-20 點擊次數(shù)：1159

今天小編再給大家分享一些注意事項：

方法調(diào)整

有機相，pH值，進樣量，柱溫等。

有機相

案例

色譜條件

色譜柱：月旭Ultimate^®XB C18（4.6×250，5μm）。

流動相：A相：磷酸鹽緩沖液（磷酸二氫鉀6.8g/L，磷酸調(diào)整pH=2.5）；

B相：甲醇/乙腈/四氫呋喃；

檢測器：280nm；

柱溫：30℃；

流速：1.0ml/min；

進樣量：10μL；

樣品溶劑：A相；

樣品溶液：L-去甲腎上腺素、腎上腺素、L-酪氨酸、多巴胺用溶劑配置成濃度均為：0.2mg/mL。

B相：6%乙腈

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B相：10%甲醇

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B相：2.5%四氫呋喃

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討論：在使用相似洗脫能力的有機相比例的情況下，同時檢測L-去甲腎上腺素、腎上腺素、L-酪氨酸、多巴胺4種物質(zhì)，常用的甲醇，乙腈，四氫呋喃三種有機溶劑具有不同的分離結(jié)果，可以根據(jù)表《溶劑的選擇性特征》進行篩選。

pH值

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討論：針對于易解離的物質(zhì)，不同的pH會導致物質(zhì)的解離程度不一樣，進而引起保留時間的差異，反相離子對色譜法中需要物質(zhì)成為統(tǒng)一的解離狀態(tài)。

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